1. Моя освіта – реферати, конспекти, доповіді
  2. Хімія
  3. Проблеми пов’язані з визначенням активності амілази

Проблеми пов’язані з визначенням активності амілази

 

Незважаючи на пильну увагу, яку приділяють вивченню α-амілази на протязі багатьох років, дослідження активності ферменту пов’язане з окремими труднощами: відсутністю гомогенного субстрату з певною хімічною структурою, утворенням суміші продуктів реакції, множинними механізмами реакції. В даний час в клінічній біохімії це єдиний фермент, для якого не розроблений не тільки референсний, але навіть оптимальний метод визначення активності, малодоступний стабільний матеріал для проведення зовнішнього контролю якості. Відсутність уніфікованого субстрату, різні механізми реакції і утворені продукти реакції – все це знаходить відображення у безлічі способів вираження активності ферменту (амілокластіческіе одиниці, хромогенні та ін.), Що ускладнює зіставлення даних, отриманих різними методами.

Різниця в механізмі і продуктах реакції, способі вираження активності ферменту ставить питання про порівнянності даних, отриманих різними методами. У ряді робіт встановлено, що результати визначення активності α-амілази добре корелювали один з одним, проте значення активності ферменту, визначені кожним з методів, були різними. У цьому зв’язку висловлено сумнів у ідентичності даних, отриманих в реакціях з різними механізмами дії.

Серед звичайно використовуваних методів розділення ізоферментів α-амілази слід зазначити ЕФ на різних підтримуючих середовищах, хроматографію, ізоелектричного фокусування, визначення активності з урахуванням специфічності по субстратів і інгібіторів кожного з изоферментов, иммунохимические методи.

α-Амілаза – стабільний фермент, активність якого не змінюється при зберіганні при 20 ° С протягом тижня і при 4 ° С протягом місяця. Зберігання проб сироватки крові при -20 ° С протягом 3 міс при неодноразових заморожування і відтавання не змінює спектр ізоферментів. Зміни істинного розподілу фракцій амілази можуть відбуватися, якщо процедуру ЕФ проводять при 37 ° С протягом кількох годин. Небажана також тривала інкубація при 37 ° С при визначенні низької активності ферменту.

Особливі проблеми пов’язані із зберіганням проб сечі. Відомо, що амілаза швидко інактивується при рН нижче 5,0, тому рекомендовано збирати сечу в буфер при рН 7,0. Однак якщо сеча знаходиться в сечовому міхурі хоча б деякий час, фермент буде инактивирован кислої сечею. Сумнівно також, чи зможе фермент уникнути розпаду в дуже кислому сечі, перед тим як покине нирки. Вплив сечі з низьким рН на активність ферменту необхідно враховувати при дослідженні відносин кліренс амілази і креатиніну, проведеному у хворих з порушеною функцією нирок.

ПОДІЛИТИСЯ:

Дивіться також:
Навіщо вивчати хімію