Створення рекомбінантної ДНК

Для перенесення необхідного генетичного матеріалу використовуються особливі структури, здатні переносити чужорідну ДНК у клітину-реципієнт – вектори. Ще на початку розвитку генної інженерії вектори отримали назву «молекулярне таксі». В якості векторів можуть використовуватися два види структур, що містять ДНК: плазміди і віруси. ДНК вектора розрізають тими ж рестриктазами, які використовувалися для екзогенної ДНК.
Рестріктази, зазвичай використовуються в генній інженерії, розрізають обидві ланцюга ДНК в симетричних точках паліндромів – коротких ділянок ДНК, в яких запис нуклеотидів зліва направо в одного ланцюга аналогічна записи справа наліво іншого ланцюга. Так, перша рестриктаза, яка знайшла широке застосування, EcoR1, дізнається послідовність GAATTC. Ділянка ланцюга ДНК вона завжди розриває між точками G і А.

Тому фрагменти ДНК, отримані за допомогою цієї рестріктази, завжди несуть на своїх кінцях одноцепочечниє ділянки ААТТ і ТТАА, комплементарні один одному. Такі ділянки отримали назву «липкі кінці», оскільки вони дозволяють будь-які фрагменти ДНК, отримані за допомогою однієї рестріктази, з’єднувати один з одним. Це властивість і використовується для з’єднання отриманої ДНК і ДНК вектора.
Кожна рестриктаза дізнається свою специфічну послідовність. Деякі рестріктази дають «липкі кінці», інші – «тупі кінці», впливаючи на зв’язку, розташовані точно один проти одного. «Тупі кінці» можна перетворити на «липкі», приєднавши штучно синтезовані послідовності, впізнавані певної рестриктазой, – лінкери. Вони дозволяють клонувати будь фрагменти чужорідної ДНК безвідносно до специфічності сайтів рестрикції. Іноді до «тупим кінців» приєднують (за допомогою ферменту термінальна трансфераза) комплементарні «хвости» – полі (А) та полі (Т).

Посилання на основну публікацію