Методи виявлення мікроба без виділення його в чисту культуру

Метод молекулярної гібридизації дозволяє виявити ступінь подібності різних ДНК. Застосовується при ідентифікації мікробів для визначення їх точного таксономічного положення, а також для виявлення мікроба в досліджуваному матеріалі без його виділення в чисту культуру. Метод заснований на здатності дволанцюжкової ДНК при підвищеній температурі (90 ° С) в лужному середовищі денатурувати, тобто розплітатися на дві нитки, а при зниженні температури на 10 ° С знову відновлювати вихідну двухцепочечную структуру. Метод вимагає наявності молекулярного зонда.

Зондом називається одноцепочечная молекула нуклеїнової кислоти, мічена радіоактивними нуклідами, ферментом, флюорохромних барвником, з якою порівнюють досліджувану ДНК.

Для проведення молекулярної гібридизації досліджувану ДНК розплітає зазначеним вище способом, одну нитку фіксують на спеціальному фільтрі, який потім поміщають в розчин, що містить зонд. Створюються умови, сприятливі для утворення подвійних спіралей. При наявності комплементарності між зондом і досліджуваної ДНК вони утворюють між собою подвійну спіраль, наявність якої фіксують методами в залежності від типу мітки зонда: підрахунком радіоактивності, імуноферментним аналізом (ІФА) або денситометрії.

Посилання на основну публікацію