ПЛР аналіз

ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція) – на сьогоднішній день найшвидший і достовірний метод діагностики інфекційних захворювань.

Принцип методу полімеразної ланцюгової реакції був розроблений Кері Мюлісом (Kary Mullis) в 1983 р За своє відкриття К. Мюлліса в 1993 р отримав Нобелівську премію з хімії.

Метод ПЛР дозволяє домогтися значного збільшення малих концентрацій певних фрагментів нуклеїнової кислоти (ДНК) в біологічному матеріалі (пробі). Метод заснований на багаторазовому виборчому копіюванні (ампліфікації) певної ділянки ДНК за допомогою ферментів в штучних умовах.

Переваги методу ПЛР діагностики як методу діагностики інфекційних захворювань

Пряме визначення наявності збудників

Багато традиційні методи діагностики, наприклад імуноферментний аналіз, виявляють білки-маркери, які є продуктами життєдіяльності інфекційних агентів, що дає лише опосередковане свідчення наявності інфекції. Виявлення специфічної ділянки ДНК збудника методом ПЛР дає пряму вказівку на присутність збудника інфекції.

висока специфічність

Висока специфічність методу ПЛР обумовлена тим, що в досліджуваному матеріалі виявляється унікальний, характерний тільки для даного збудника фрагмент ДНК. Специфічність задається нуклеотидной послідовністю праймерів, що виключає можливість отримання помилкових результатів, на відміну від імунологічних методів аналізу, де нерідкі помилки в зв’язку з перехресно-реагують антигенами.

висока чутливість

Метод ПЛР дозволяє виявляти навіть поодинокі клітини бактерій або вірусів. ПЛР аналіз виявляє наявність збудників інфекційних захворювань в тих випадках, коли іншими методами (імунологічними, бактеріологічними, мікроскопічними) це зробити неможливо. Чутливість ПЛР аналізу становить 10-100 клітин в пробі (чутливість імунологічних і мікроскопічних тестів – 103-105 клітин).

Універсальність процедури виявлення різних збудників

Матеріалом для дослідження методом ПЛР служить ДНК збудника. Метод заснований на виявленні фрагмента ДНК або РНК, що є специфічним для конкретного організму. Подібність хімічного складу всіх нуклеїнових кислот дозволяє застосовувати уніфіковані методи проведення лабораторних досліджень. Це дає можливість діагностувати кілька збудників з однієї біопроб.

Висока швидкість отримання результату аналізу

Для проведення ПЛР аналізу не потрібно виділення і вирощування культури збудника, що займає велику кількість часу. Уніфікований метод обробки біоматеріалу та детекції продуктів реакції і автоматизація процесу ампліфікації дають можливість провести повний аналіз за 4-5 годин.

Можливість діагностики не тільки гострих, але і латентних інфекцій

Особливо ефективний метод ПЛР для діагностики важко культивованих, некультивованих і персистуючих форм мікроорганізмів, з якими часто доводиться стикатися при латентних і хронічних інфекціях, оскільки цей метод дозволяє уникнути складнощів, пов’язаних з вирощуванням таких мікроорганізмів в лабораторних умовах. Застосування ПЛР діагностики також дуже ефективно щодо збудників з високою антигенною мінливістю та внутрішньоклітинних паразитів.

Матеріалом для здійснення ПЛР-діагностики можуть служити

Епітеліальні зіскрібки зі слизових оболонок. Зазвичай використовуються для діагностики захворювань, що передаються статевим шляхом (ЗПСШ), таких як гонорея, хламідіоз, мікоплазмоз, уреаплазмоз, трихомоніаз, гарднерельоз, герпетична та інші інфекції, що вражають слизові оболонки.
Сеча. Сеча може використовуватися при інфекційному ураженні сечостатевого тракту у чоловіків і сечовивідних органів у жінок (у чоловіків використання в якості матеріалу сечі замінює епітеліальний зішкріб).
Мокрота. Мокрота використовується для діагностики туберкульозу та рідше для діагностики респіраторних форм хламідіозу і мікоплазмозу. Мокротиння в кількості 15-20 мл збирають в стерильний (одноразовий) флакон.
Кров, плазма, сироватка. Використовуються для ПЛР аналізу вірусів гепатитів B, C, D, G, герпесу, ЦМВ, ВІЛ, дослідження генів людини.

Біологічні рідини. Сік простати, плевральна, спинномозкова, навколоплідної, суглобова рідина, бронхоальвеолярний лаваж, слина забираються за показаннями.

Біоптати. Найчастіше використовують біоптати шлунка і дванадцятипалої кишки для виявлення хелікобактерної інфекції.

...
ПОДІЛИТИСЯ: