Внутригенна компліментація і гетеродуплексне картування

При картуванні ts (температурочутливістю) і амбермутацій фага Т4 було виявлено, що деякі fc-мутації в залежності від їх положення на генетичній карті і результатів функціонального цис-транс-тесту з тісно зчепленими амбермутаціямі повинні стосуватися одного і того ж гену, але тим не Проте в цис-транс-тесті вони дають комплементація.

Такі ж випадки внутрігенних комплементации були виявлені в геномах бактерій та інших організмів. Внутрігенних Комплементація можна пояснити на основі уявлень про четвертичной структурі білка. Багато білки виконують свою функцію лише тоді, коли вони організовані в вигляді четвертичной структури, тобто складаються з декількох поліпептидних ланцюгів. Наприклад, фермент (J-галактозидов через являє собою агрегат з чотирьох ідентичних поліпептидних ланцюгів. Розглянемо ts-мутацію гена, детермінують подібний білок. Мутантний фенотип ts може бути наслідком заміни амінокислоти в поліпептидному ланцюзі.

В результаті заміни інтервал температур, в якому даний білок може приймати активну четвертинних структуру, виявляється звуженим, тобто при пермісивними температурі 25. ° С такий білок зберігає свою активність, а при 42 ° С він денатурируется. Припустимо, що в одній клітці присутні дві копії гена, детермінують даний білок. Як і в цис-транс-тесті, ці копії несуть різні ts-мутації. Тоді повинні виникнути гібридні агрегати мутантного білка, частина поліпептидних ланцюгів якого синтезована під контролем одного гена, а частина – під контролем іншого fs-мутантного гена. В результаті температурний інтервал, в якому утворюється фізіологічно активна структура, може бути ширше. Значить, дві мутації одного гена можуть бути взаємно скомпенсовані.

Гетеродуплексное картування

Два зразка ДНК (два різних, але близьких генома) змішують, розплавляють, а потім проводять ренатурації утворилася одноцепочечной ДНК. Серед ренатурірованних молекул ДНК можуть виявитися і такі структури, в яких окремі ділянки ДНК не будуть пов’язані з комплементарними їм ланцюгами. Такі ділянки під електронним мікроскопом мають вигляд одноланцюгових петель. Можна виміряти і встановити їх довжину і положення по відношенню до решти геному. Гетеродуплексное картування може проводитися і при додаванні до ДНК відповідної мРНК. Гібриди ДНК / РНК часто виявляються навіть більш стабільною, ніж гібриди ДНК / ДНК. Картування ведеться також по локалізації одноланцюгових петель.

...
ПОДІЛИТИСЯ: