Витяг ембріонів і їх оцінка

Метод вилучення зародків у донорів є найважливішою складовою частиною загальної технології трансплантації ембріонів у сільськогосподарських тварин, які вимагають ретельного і безпомилкового здійснення. Ефективність методу трансплантації багато в чому здійснюється способом вилучення ембріонів. Для трансплантації рекомендується використовувати бластоцити, тому ембріони витягують між 7-8 сут. після першого штучного осіменіння. Запліднені яйцеклітини від суперовуліровавшіх тварин можуть бути вилучені 3 способами: після забою донора, хірургічним і нехірургічним.

Загальний успіх трансплантації ембріонів залежить не тільки від рівня суперовуляції, але і від здатності вимивати ембріони. Раніше вимивали ембріони за допомогою металевої канюлі з валиком, зафіксованої в яйцепровід. В результаті фіксації канюлі в яйцепровід у деяких донорів у цьому місці утворилися післяопераційні спайки, які перешкоджали потраплянню яйцеклітини в яйцепровід при овуляції, і 20-30% прооперованих донорів ставали безплідним. Автори вдосконалили процедуру вимивання ембріонів для того, щоб виключити маніпуляції з яйцепроводів. Спочатку проводили лапароскопічне обстеження яєчників донора. У дослідженнях результативність вимивання ембріонів з рогів матки полулапароскопіческім способом в середньому склала 61,5%. Цей метод необхідно використовувати для вимивання 5-6 денних ембріонів у овець для того, щоб зберегти відтворну здатність донорів. Зазначено, що сезон, тип і доза генадотропнимі гормону, індивідуальні особливості донора, вік ембріонів і деякі інші фактори роблять певний вплив на ефективність вимивання [35].

Вітчизняні вчені пропонують виробляти багаторазове витяг ембріонів вівцематок – донорів каракульських овець в злучний сезон року, піддаючи їх повторній обробці з метою отримання від них більшого числа ембріонів [36, 37]. Однак, М. Калгімбаева [38] при введенні повторної дози препарату СЖК після случного сезону у 36,4% донорів виявлялася висока і середня чутливість до нього. Тому автор пропонує дворазове витяг ембріонів протягом одного року застосовувати лише у випадках гострої потреби в збереженні або прискореному розмноженні рідкісних високоцінних генотипів.

У дослідженнях з трансплантації застосовують різні способи та строки вимивання ранніх ембріонів з репродуктивних органів вівцематок-донорів [39, 40].

Н. І. Сергєєв та ін. [41] вимивання ембріонів овець виробляли на 6 добу статевого циклу з рогу матки, при цьому вимиваемость склала 70,9% від загального числа овуляцій.

У дослідженнях [42] вимивання ембріонів гормонально оброблених вівцематок виробляли з просвіту яйцеводов в проміжку між 32-80 годинами після виявлення вівцематок-донорів у стадії статевого полювання (виявлення вівцематок в стадії статевого полювання виробляли за допомогою барана-пробника два рази на добу – вранці і ввечері).

В результаті досліджень було встановлено, що відсоток вимиваемості ранніх ембріонів з просвіту яйцеводов певною мірою залежить від рівня поліовуляції в яєчниках.

Залежність відсотка вимиваемості яйцеклітин та ембріонів з яйцеводов вівцематок-донорів від рівня поліовуляції показала, що найбільший відсоток вимиваемості ембріонів з яйцеводов був відзначений у донорів при невисокому рівні поліовуляції (3-6) 91,3 відсотків. У тварин з більш високим рівнем поліовуляції (7-10; 11-14; 15-18) спостерігається зниження відсотка вимиваемості ембріонів відповідно від 85,7; 84,0; 76,4 відсотка. У тварин з більш високим рівнем поліовуляції (19 і більше) відсоток вимиваемості падає майже на половину (53,5%). Ці дані свідчать про те, що з підвищенням рівня поліовуляції відсоток вимиваемості зародків з яйцеводов знижується.

Дане явище можна пояснити тим, що при гормональної обробці самок спостерігається збільшення об’єму рідини в статевому тракті, посилюється його скоротлива діяльність. Це веде до порушення балансу статевих гормонів в організмі, яке перешкоджає нормальному переміщенню статевих клітин.

Перехід зародків у каракульських овець в порожнину рогів матки в природних умовах відбувається в проміжку між 66-72 годинами.

При індукції поліовуляції спостерігається деяке скорочення термінів перебування ранніх ембріонів в яйцепроводах вівцематок-донорів.

Дослідження автора показали, що при промиванні репродуктивних органів вівцематок з поліовулірованнимі яєчниками після закінчення 62-66 годин від часу виявлення їх (вівцематок) у стадії статевого полювання вже частина ембріонів виявляється в порожнині рогів матки.

Дане явище пояснюється тим, що овуліровать яйцеклітини, потрапляючи в яйцепровід, не затримуються в ньому, в продовження того часу, який вони знаходяться при природній овуляції. Вони переходять в порожнину рогів матки дещо раніше.

Було виявлено, що при вимиванні ембріонів з яйцеводов вівцематок між 32-48 годинами від часу їх виявлення в стадії статевого полювання до моменту вимивання середнє число овуляцій на одного поліовуліровавшего донора склало 4,3; при вимиванні в проміжку між 48-64 годинами – склало 8,3; а в проміжку 64-80 годин – 8,5 овуляций. При тому найбільший відсоток вимиваемості спостерігався при вимиванні в проміжку 32-48 годин (92,4%). Але при цьому число овуляцій в середньому на одного донора склало всього 4,3; а найбільше число овуляцій в середньому на одного донора було виявлено при вимиванні в проміжку між 64-80 годин (8,5%), але при цьому відсоток вимиваемості ембріонів склав 31,8%.

Найбільше число вимитих ембріонів (7,2) в середньому на одного донора виявлено при вимиванні яйцеводов в проміжку між 48-64 годин.

Отже, на відсоток вимиваемості ранніх ембріонів з яйцеводов вівцематок-донорів впливає термін їх вимивання.

В результаті проведених досліджень можна зробити висновок, що на відсоток вимиваемості ранніх ембріонів з яйцеводов вівцематок-донорів впливають рівень поліовуляції в яєчниках і терміни їх вимивання.

Оптимальним терміном вимивання ембріонів з яйцеводов гормонально оброблених вівцематок є 48-64 години від моменту виявлення вівцематок в стадії статевого полювання, при якому отримано в середньому 7,2 яйцеклітин і ранніх ембріонів при вимиваемості 86,7 відсотків [43].

Основи трансплантації ембріонів в каракулеводства закладені в 1986 році співробітниками стратили каракулеводства Н. Алібаєва, О. Бекетауовим [44]. У ході експериментів були відпрацьовані основні технологічні прийоми трансплантації ембріонів і вдосконалені деякі з них. Так, наприклад, аналіз отриманих даних показав, що кращі результати дає витяг ембріонів комбінованим способом, т. Е. Одночасним промиванням роги матки і яйцевода: від 12 донорів, що мали в середньому по 6,7 овуляций, вилучено 77,5% ембріонів, або 5,2 на кожного донора. Дослідження в цьому напрямку тривають.

За результатами Н. Алібаєва, О. К. Бекетауова, М. Калгімбаевой [45] на високу ефективність вимивання ембріонів донорів суттєво впливає обсяг повернутої рідини. Вони рекомендують матково-трубно-матковий спосіб вимивання ембріонів, суть якого полягає в тому, що перед промиванням блокується матково-трубне з’єднання зав’язуванням стерильною шовковою ниткою на рівні 1,0 – 1,5 см. До межі переходу роги матки до яйцепроводов і промивка проводиться почергово від верхівки роги матки в бік буфірікаціі, де вставлений двоканальний катетер Фоллея і від верхньої точки нижнього блокованого ділянки в напрямку бахромки, де вставлена ??промивна пластмасова трубка. Причому при промиванні роги матки набирають шприцом по 20 мл фосфатно-сольовий середовища і вводять в ріг з подальшим нагнітанням 20мл повітря, а промивка яйцепроводів здійснюється в такій же послідовності з нагнітанням 10мл промивної рідини і 10 мл повітря.

При цьому встановлено, що обсяг повернутої рідини при застосуванні нового способу склав 91,3%, що на 33,5 більше порівняно з традиційними способами. І це збільшує вимиваемость на 20% (Р <0,001).

Головним критерієм оцінки тварин-донорів є кількість і якість ембріопродукціі, одержуваних від них. Наведено дані розвитку ембріонів за стадіями у донорів, дворазово оброблених протягом одного случного сезону. Відзначено, що за деякими окремими стадіями спостерігається незначне зниження показників у 2-й цикл: бластомерів з 24,3 до 9,5%, ранніх морул – з 42,4 до 33,3%. Експерименти по багаторазовому витяганню ембріонів, проведені в злучний сезон року, дозволили встановити, що каракульські вівці, піддані повторній гормональної обробці, можуть відтворювати велику кількість ембріонів з високою якістю. Отже, враховуючи потенціал повторних обробок для стимуляції суперовуляції, доводиться, що саме цей спосіб буде єдиним гарантом, що перешкоджає зникненню і сприяє збереженню особливо рідкісних генотипів каракульських овець [46].

Посилання на основну публікацію