Трансгенні екземпляри

У 1979 р в Інституті молекулярної генетики АН СРСР і на кафедрі ембріології МГУ були розпочаті спільні експерименти по перенесенню чужорідної генетичної інформації в геном ссавців шляхом прямої мікроін’єкції ДНК в пронуклеуси зигот миші. Перші результати по інтеграції чужорідної ДНК (ДНК аденовірусу SA7 мавп) з геномом миші були отримані нами в 1981 р незалежно від що з’явилися в цей час зарубіжних робіт.

Вже до кінця 1982 р Інституті молекулярної генетики було отримано п’ять поколінь трансгенних мишей, в геномі яких містилися повні копії або фрагменти ДНК високоонкогенного мавпячого аденовірусу SA7.

Спочатку для трансгенозу використовували головним чином ДНК різних вірусів і окремі вірусні гени, так як клонування еукаріотичних генів в той час тільки починалося. Було показано, що в цілому екзогенна ДНК при її мікроін’ецірованіі в зиготи мишей здатна інтегрувати з геномом хазяїна, експресуватися в клітинах і стабільно передаватися потомству. Поряд з цим уже в перших роботах спостерігалися випадки зміни структури як самих трансгенів, так і фланкують їх послідовностей ДНК господаря (освіта конкатенатов, перебудови, делеции і ін.).

На початковому етапі робіт по трансгенозу багато авторів як екзогенної ДНК використовували ген тимідинкінази (tk) вірусу простого герпесу (HSV). При цьому високі рівні експресії гена HSV спостерігали в різних органах і тканинах трансгенних мишей в разі, коли ген перебував під контролем сильного промотора металлотіонеінового гена 1 (MT-J) миші. У роботах вітчизняних авторів активність вірусної тимідинкінази була виявлена і в тих випадках, коли ген HSV не мав чужого промотора. У серії наших робіт із введення гена HSV в зиготи мишей було показано, що присутність в плазмиде довгих кінцевих повторів (LTR) ретровірусів -LTR провируса саркоми Рауса (RSV) або LTR ендогенного ксенотропний провируса лейкозу мишей (MuLV) – сприяло перенесенню і експресії чужорідної ДНК .

З розвитком техніки молекулярного клонування генів число публікацій по отриманню та дослідженню трансгенних мишей стрімко зростало, поступово розширювався спектр проблем і завдань, що вирішуються за допомогою трансгенозу. Однією з найбільш вражаючих робіт на ранніх етапах розвитку трансгенозу були експерименти Пальмітера з співавт. (Palmiter et al., 1982) по мікроін’єкції в зиготи мишей гена гормону росту (ГГР) щури, що знаходиться під контролем промотора гена МТ-1 миші. Перенесення такого штучного конструкту привів до прискореного зростання мишей в онтогенезі і значного збільшення ваги трансформованих тварин, які розвинулися з прооперованих зигот. Аналогічні результати були отримані і в нашій роботі, коли в якості чужорідної ДНК використовували клонований нами ГГР бика, що знаходиться під контролем LTR вірусу пухлини молочної залози миші (MMTV). Вага трансгенних самців був приблизно на 50% більше, ніж у контрольних мишей, і ці фенотипічні особливості передавалися нащадкам. Незабаром аналізу стадіо- і тканеспецифической експресії були піддані сотні структурних генів, генів різних вірусів, онкогенов, антионкогенов і ін.

До середини 80-х років були початі експерименти зі створення трансгенних сільськогосподарських (с / г) тварин. До цього часу були підібрані оптимальні умови для візуалізації пронуклеусов зигот с / г тварин, оскільки більшість зигот має значну кількість пігментних і жирових гранул, що ускладнюють процес мікроін’єкції. У першій з опублікованих робіт з отримання трансгенних кроликів, свиней і овець автори використовували як трансгени ГГР людини, однак настільки драматичного прискорення темпів зростання тварин, як це було отримано на мишах, не спостерігалося. Разом з тим у трансгенних свиней були помічені збільшення ефективності споживання їжі і помітне зниження жиру. Слід підкреслити також, що у трансгенних свиней з підвищеним вмістом в крові гормону росту людини відзначалися відхилення в стані здоров’я.

...
ПОДІЛИТИСЯ: