Світлова мікроскопія

Для виявлення та дослідження мікроорганізмів застосовують мікроскопи. Світлові мікроскопи призначені для вивчення мікроорганізмів, які мають розміри не менше 0,2 мкм (бактерії, найпростіші і т. П.), Електронні для вивчення більш дрібних мікроорганізмів (віруси) і дрібних структур бактерій.

Мікроскоп складається з оптичної та механічної частин.

Механічна частина представлена:

· Штатив – складається з тримача тубуса і масивної ніжки, яка служить опорою мікроскопа;

· Тубус – в ньому розміщена оптична система, переміщається за допомогою двох гвинтів, в нижній частині є револьверний пристрій з отворами для об’єктивів, в верхньому отворі – окуляр;

· Предметний столик – укріплений на штативі, може бути рухомим.

Оптична частина представлена:

· Дзеркало відображає падаюче на нього світло і направляє його в конденсор для освітлення препарату. Одна сторона – плоска, її використовують при будь-якому джерелі світла і будь-якому збільшенні; інша – увігнута, її використовують для роботи без конденсора при малому збільшенні;

· Конденсор складається з декількох лінз, що збирають відбитий дзеркалом пучок світла і направляють їх на площину препарату. У нижній частині конденсора – ірисова діафрагма, за допомогою якої можна змінювати кут променів і кількість світла, що пропускається;

· Об’єктив – система лінз, що будують дійсне, збільшене і перевернуте зображення об’єкта. Зовнішня (передня) лінза називається фронтальною. Дається нею зображення має низку аберацій, властивих простий лінзі. Ці недоліки усуваються вищерозташованими коррекционними лінзами. Кожен об’єктив характеризується властивим йому власним збільшенням, фокусною відстанню. Об’єктиви можуть бути сухі і імерсійним. Сухі дають слабке збільшення через велику фокусної відстані між фронтальною лінзою і препаратом. При імерсійному мікроскопірованіі на препарат наносять краплю иммерсионного масла (його показник заломлення близький до такого скла), при цьому не відбувається розсіювання променя світла, а значить, добре висвітлюється поле зору.

· Окуляр – це збільшує оптична система, через яку розглядається дійсне зображення об’єкта, яке дає об’єктив. Окуляр складається з двох лінз: щороку збирає, зверненої до об’єктиву, і очної, зверненої до ока. Між ними знаходиться діафрагма, яка затримує бічні промені і пропускає промені, близькі до оптичної осі і дають більш контрастне зображення. Окуляр ще раз збільшує зображення об’єкта, але не розкриває нових деталей його будови. Мікроскопи бувають монокулярні (дають плоске зображення) і бінокулярні (дають об’ємне, стереоскопічне зображення).

Оптична потужність мікроскопа включає в себе можливе збільшення, що дозволяє силу і здатність точного відтворення, що залежить від усунення аберацій.

Загальне збільшення мікроскопа – це твір збільшень об’єктива і окуляра.

Роздільна здатність мікроскопа – це найменша відстань між двома точками об’єкта, які сприймаються оком роздільно і не зливаються в одну: чим менше розмір частки, яку видно в мікроскоп, тим більше його роздільна здатність. Роздільна здатність об’єктива залежить від довжини хвилі світла і числової апертури об’єктивів і конденсора.

Залежно від середовища, яка знаходиться між об’єктивом і препаратом, розрізняють «сухі» об’єктиви малого і середнього збільшення (до 40 х) і імерсійним з максимальною апертурою і збільшенням (90-100 х). «Сухий» об’єктив – це такий об’єктив, між фронтальною лінзою якого і препаратом, знаходиться повітря.

Особливістю іммерсійних об’єктивів є те, що між фронтальної лінзою такого об’єктива і препаратом поміщають іммерсійну рідину, що має показник заломлення такий же, як скло (або близький до нього), що забезпечує збільшення числової апертури і роздільної здатності об’єктива. Як иммерсионной рідини для об’єктивів водної імерсії використовують дистильовану воду, а для об’єктивів масляної імерсії – кедрова олія або спеціальне синтетичне іммерсійне масло. Використання синтетичного иммерсионного масла краще, оскільки його параметри більш точно нормуються, і воно на відміну від кедрового, що не засихає на поверхні фронтальної лінзи об’єктива.

Правила роботи з иммерсионной системою:

1. встановити мікроскоп на мале збільшення;

2. навести максимальну освітленість (дзеркало, конденсор, діафрагма);

3. встановити препарат на столик;

4. нанести краплю олії на препарат;

5. встановити іммерсійний об’єктив;

6. опустити об’єктив в краплю олії за допомогою макровінта;

7. спостерігаючи в окуляр обертати макровінт до появи зображення;

8. мікрогвинти встановити більш чітке зображення;

9. провести мікроскопію мазка з описом морфологічних властивостей;

10. підняти тубус вгору, зняти препарат і очистити об’єктив від масла;

11. встановити мікроскоп в нейтральне положення (мале збільшення, тубус вниз).

Існує кілька модифікацій світлового мікроскопа, а, отже, і кілька видів світлової мікроскопії. Більшість бактеріальних об’єктів прозорі у видимому світлі. Пофарбовані препарати не дозволяють визначити деякі морфологічні властивості таких об’єктів. Для дослідження живих нефіксованих і нефарбованих об’єктів застосовують пристрої:

· Фазово-контрастне пристрій забезпечує чітке зображення об’єктів. В основі методу лежить зміна фази світлових променів при проходженні їх через прозорі об’єкти. Людське око виявляє тільки відмінності в довжині (колір) і амплітудою (інтенсивність) світлової хвилі, але не дозволяє виявити відмінності в фазі. За допомогою пристрою відмінності в фазі перетворюються в зміна амплітуди. Пристрій являє собою прозорий диск, на поверхні якого напилю кільце з металу (фазовий кільце), розташований в задній площині об’єктива; і кільцеву діафрагму (светонепроницаемая пластина з прозорим кільцеподібним ділянкою), вміщена під конденсором.

Темнопольний конденсор відрізняється від звичайного тим, що пропускає тільки косі крайові промені джерела світла, які з огляду на сильного нахилу не потрапляють в об’єктив, в результаті поле зору мікроскопа залишається темним. На об’єкт потрапляють тільки бічні промені, відбиті від внутрішніх дзеркальних поверхонь конденсора. Ці промені відбиваються в лінзу об’єктива і дозволяють бачити світле зображення на темному тлі.

ПОДІЛИТИСЯ:

Залишити відповідь

Ваша e-mail адреса не оприлюднюватиметься.