Рестрикція ДНК

Отримати фрагмент геномної ДНК з метою подальшого вивчення можна шляхом рестрикції ДНК. Виділена з клітин органів ДНК піддається розщепленню рестрикційний ендонуклеаза (рестриктазами). Це ферменти бактеріального походження, що беруть участь в розпізнаванні чужорідних молекул ДНК і їх знищення. Кожен такий фермент здатний дізнаватися в будь дволанцюжкової молекулі ДНК специфічну послідовність з 4-12 нуклеотидів. Такі послідовності часто є паліндромний, тобто послідовності нуклеотидів в них читаються в обох напрямках однаково. Дві ланцюга ДНК розрізаються в ділянці впізнавання або поблизу від нього, причому ланцюга в багатьох випадках розрізаються не пряма один проти одного, а навскоси, утворюючи в результаті «липкі» кінці. Ці одноцепочечниє кінцеві ділянки здатні утворювати комплементарні пари основ з будь-якими іншими одноланцюжковий кінцевими ділянками, отриманими за допомогою того ж ферменту.

Відомо більше 500 різних типів рестриктаз, кожна з яких здатна розрізати молекулу ДНК в певному місці – сайті рестрикції. Довжина рестрикційних фрагментів залежить від розподілу сайтів у вихідній молекулі ДНК: чим частіше розташовані сайти, тим утворюються фрагменти коротше. Залежно від частоти розташування сайтів рестрикції виділяють три класи рестриктаз: частощепящіе, узнающие короткі специфічні послідовності довжиною в 4-5 нуклеотидів, среднещепящіе, дізнаються послідовності 6-7 пар нуклеотидів, редкощепящіе, дізнаються послідовності 8-12 пар нуклеотидів.

Після обробки ділянки ДНК декількома рестриктазами утворюються рестрикційні фрагменти, і за допомогою спеціального аналізу можна визначити розташування цих фрагментів відносно один одного в молекулі ДНК, тобто побудувати рестрикційну карту.

Посилання на основну публікацію