Радіочутливість дріжджів

Дані, що дозволили припустити участь гена CDC28 в checkpoint-контролі, були опубліковані порівняно недавно. Однак ще більше 10 років тому ми вперше виявили, що мутація cdc28-srm, викликає підвищення чутливості клітин до іонізуючої радіації.

У дріжджів відомі два основних шляхи репарації пошкоджень ДНК, викликаних іонізуючою радіацією. Аналіз попарних взаємодій мутацій cdc28-srm, rad52 і rad6 показав, що обидві мутації rad не є епістатічнимі по відношенню до cdc28-srm, тобто ген CDC28, мабуть, не належить безпосередньо до жодного зі згаданих двох основних шляхів репарації. Разом з тим епістатічной по відношенню до cdc28-srm є мутація rad9, тобто обидві ці мутації зачіпають, а відповідні гени залучені в один і той же механізм, модулирующий радіочутливість клітин. RAD9, як уже згадувалося, належить до checkpoint-генам, контролюючим регуляцію клітинного циклу в його певних точках за механізмом зворотного зв’язку. Таким чином, дані про вплив мутації cdc28-srm на радіочутливість дріжджових клітин узгоджуються з поданням про участь гена CDC28 в checkpoint-контролі.

Ми спробували також оцінити вплив інших мутацій srm на чутливість дріжджових клітин до летального дії у-випромінювання. З цією метою використовували згадані раніше диплоїдні штами, цис-гетерози-Готня по маркерами VII хромосоми. Типові криві виживання для диплоїдних штамів з генотипами відповідно SRM + / srm8, srm8lsrm8, srml2lsrml2, srml5lsrml5, srm17lsrm17, показують, що гомозиготи за рецесивним мутаціям srm8, srml2 і srm17 більш чутливі до летального дії випромінювання, ніж гетерозиготний штам, що виявляє нормальну радіочутливість. Мутації srml і srml5 не виявляється помітного впливу на радіочутливість клітин.

Ця взаємодія необхідно для фосфорилювання білка Rad53p, індукованого ушкодженнями ДНК, зупинки в G2 / M і транскрипційного відповіді. Разом з тим наведені дані про взаємодію білків Rad9p і Rad53p не дозволяють з упевненістю робити універсальні прогнози щодо взаємодії мутацій наприклад, ефекти rad9A і rad53 щодо чутливості клітин до MMS адитивні.

Несподіваний результат отриманий при аналізі взаємодії між мутаціями cdc28-srm і rad53. Спільне вплив цих мутацій на радіочутливість клітин характеризується аддитивностью ефектів окремих мутацій. При цьому, по-перше, можна з певністю стверджувати, що жодна з розглянутих двох мутацій не є епістатічной по відношенню до іншої, і, по-друге, поєднання мутацій cdc28-srm rad53 визначає помітно більш високу радіочутливість клітин в порівнянні з одиночною мутацією rad9A, яка епістатічна по відношенню до кожної з мутацій cdc28-srm і rad53.

Можливо, незалежний механізм впливає на радіочутливість клітин і забезпечується протєїнкиназамі Cdc28 і Rad53, фосфорилюється загальний субстрат, в результаті чого досягається адитивність ефектів мутацій cdc28-srm і rad53.

Безсумнівно, участь checkpoint-генів у визначенні чутливості клітин до ушкоджують агентам виходить за рамки ролі цих генів в checkpoint-регуляції. На користь такого висновку свідчить, наприклад, неможливість повністю зняти підвищення чутливості до ушкоджують агентам у мутантів S. cerevisiae rad9, rad53 і mecl за рахунок спеціально викликаної додаткової затримки клітинного циклу. Відзначимо також, що у мутантних клітин chkl порушена здатність зупиняти клітинний цикл на кордоні G2 / M у відповідь на індуковані пошкодження ДНК, але не змінена чутливість до летальних ефектів цих пошкоджень.

Мутант по гену гелікази SGS1, у якого порушено S / M-checkpoint, що не виявляє підвищену чутливість до y і УФ випромінювання. У ряді випадків підвищення радіочутливості у мутантів S. cerevisiae за checkpoint-гени не вдається повністю пояснити порушеннями власне checkpoint-контролю. Можливо, відповідні мутації також перешкоджають активації репарационной системи і / або оптимальної доставки її компонентів до сайту пошкодження ДНК. Роль checkpoint-генів в механізмах, що визначають чутливість клітин до ДНК-тропний агентам, зокрема, в механізмах репарації ДНК, представляється такою, що заслуговує подальшого аналізу.

...
ПОДІЛИТИСЯ:

Дивіться також:
Жування