Підтримка генома

Ген SRM12 був клонований в складі фрагмента ДНК завдовжки 11,6 т.п.н. з геномного банку дріжджів, сконструйованого на основі вектора рЗбб. Рестрикційне картування і часткове секвенування клонованого фрагмента ДНК дозволили визначити його положення на хромосомі XVI S. cerevisiae.

Даний фрагмент містить кілька рамок зчитування. Субклонірованіе показало, що ген SRM12, цілком ймовірно, ідентичний гену SUP110 / HFI1 / ADA1, що кодує транскрипційні коактіватор і спочатку вивченого в лабораторії проф. Т. Д. Фокса (Корнеллський університет, США) (Brown, 1994).

Професор Фокс люб’язно надав нам плазмиду pNGB52, несучу клонований ген SUP110, і штам дріжджів NGB121 з інактивованих геном SUP 110 (SUP110: LEU2). При схрещуванні цього штаму з 5гт72-мутантом утворювалися повільно розмножуються і не здатні споруліровать діплоїден, фенотипически відрізнити від гомозигот srml2lsrml2. Плазміда pNGB52 комплементіровала мутацію srml2. Перераховані дані свідчать про ідентичність SRM12 гену SUPU0IHFIIIADA1.

Від схрещувань кожного з мутантів srml, cdclS-srm, srm8, srml2, srmlS і srtn17 з батьківськими лініями 71а або 71а відібрали по 2 повних тетради. Для кожного моноспорового клону з цих тетрад визначили чутливість до мутагенного дії БЕ. Клони srml, cdc28-srtn і srm8, no порівнянні з клонами SRM +, виявилися істотно менш чутливими до мутагенного дії БЕ.

Суттєвого впливу мутацій srtnl2, srm! 5, srml7 на мутабільність клітин під дією БЕ не виявлено (дані не наведено). Мутанти, резистентні до мітохондріального мутагенних бромистий етидій (БЕ), описані у дріжджів Kluyveromyces lactis і у S. cerevisiae. У К. lactis мутант по гену РМА1, що кодує Н + -АТРазу плазматичноїмембрани, виявляв резистентність до БЕ і дефектність по транспорту іонів К +. Взагалі, для значної частки (10-20%) БЕ-резистентних мутантів у К. lactis має місце дефектність по транспорту БЕ і одночасно з транспорту одновалентних катіонів, особливо іонів К +. Транспорт в клітку молекул БЕ і катіона К + залежить від мембранного потенціалу і, мабуть, здійснюється за участю одних і тих же носіїв. Оскільки у мутантів S. cerevisiae виявляються зміни мітохондріального мембранного потенціалу, можна припустити, що виявлена нами резистентність мутанта srm8 до БЕ пов’язана зі зниженою проникністю клітин і / або мітохондрій для барвника.

...
ПОДІЛИТИСЯ: