✅Особливості та принципи виділення чистих культур бактерій

Чистою культурою вважається сукупність мікроорганізмів, що належать до одного виду. Отримання даного матеріалу є необхідним моментом дослідження в виконанні лабораторних діагностичних методик.

Для виділення чистих культур бактерій використовують мазки з крові, мокротиння, фекалій, досліджують гнійний, а також інший біологічний матеріал. У природних умовах (у повітрі, воді, грунті), продуктах харчового призначення, в трупах (людських, тварин) містяться асоціації різних видів мікроорганізмів.

Заселення (інокуляція) бактерій на живильне середовище

Відділення чистої культури важливо для докладного вивчення властивостей мікробів: морфологічних, культуральних, біохімічних, а також антигенних. За результатами даних методик дослідження можна встановити належність збудника до певного виду і типу, іншими словами, виконати його ідентифікацію.

Принципи біологічного роз’єднання бактерій мають на увазі врахування особливостей життєдіяльності мікробів з метою вибрати найбільш оптимальні методи дослідження.

Обрані методи повинні відповідати збудника за певними параметрами.

  • Тип дихання. Серед бактерій виділяють групи аеробних і анаеробних представників. Для отримання анаеробних мікробів матеріал для дослідження прогрівають. Наступний етап – культивування мікроба в анаеробних умовах. Методики отримання аеробних і анаеробних бактерій різні.
  • Спороутворення. Здатність деяких бактерій до спороутворення забезпечує захист і збереження мікроорганізмів.
  • Стійкість бактерій до агресивного впливу лугів і кислот. Стійкість деяких видів бактерій до даних речовинам забезпечує максимальне очищення досліджуваного матеріалу від домішки інших бактерій із застосуванням розчинів лугу або кислоти.
  • Рухливість бактеріальних організмів. Для відділення чистої культури рухливих мікроорганізмів використовуються методи відділення культур мікробів у краплі конденсату.
  • Чутливість мікроорганізмів до антибіотиків, деяких хімічних речовин та іншим антимікробних засобів. Для деяких збудників найбільш кращі методи виділення культур із застосуванням селективних (специфічних) поживних середовищ.
  • Антибіотики. Очищають матеріал від додаткових мікроорганізмів.
  • Здатність бактерій проникати крізь неушкоджені шкірні покриви. Ця властивість властива деяким різновидам, які володіють факторами агресії.
  • Чутливість тварин до деяких хвороб інфекційного генезу.

Методики проведення оцінки збудника

Для отримання чистих культур бактеріальних клітин застосовується ряд методів. Кожен з них застосовується в тій чи іншій ситуації і має послідовні чіткі етапи отримання колоній збудника захворювання. Розглянемо найбільш популярні.

Методика Пастера

Являє собою розведення чистих культур в середовищі для бактеріального росту (рідкої консистенції) до отримання концентрації з 1 кліткою на об’єм рідини. Даний метод виділення має найважливіше історичне значення.

Методика Коха

Відома також як методика «пластинчастих розводок». Являє собою розведення матеріалу для дослідження в агарі (в розплавленому стані з температурою 48-50 °С). Далі отриманий склад розливають по чашках Петрі, де він повинен застигнути.

Посіви зазвичай проводять з 3-4 останніх розведень, оскільки бактерій там уже мало. Таким чином, при зростанні мікробів на живильному середовищі проявляються відокремлені колонії мікроорганізмів, котрі народжуються з єдиною материнської клітини. Потім з глибини агару можна вибрати ізольовану колонію, і пересіяти її на свіже живильне середовище. Наступний етап – ідентифікація і виділення збудника.

Методика Шукевича

Використовується при необхідності виділити чисту культуру аеробів протея або яких-небудь інших мікробів, що характеризуються «повзучим» ростом. Сіють культури на воду, конденсовану біля основи скошеного агару.

При цьому методі відділення чистої культури рухливі клітинні організми (протей) піднімаються на верхівку скошеного агару, а нерухомі форми не змінюють свого розташування на середовищі посіву. Шляхом пересіву верхніх країв пророслої культури, можна вивести чисту бактеріальну культуру.

Методика Дрігальского

Спосіб Дрігальского досить широко використовується в дослідженні біологічного матеріалу шляхом розведення культур в пробірці з бульйоном або з фізіологічним розчином.

Наступний етап: одну краплю отриманого розчину за допомогою стерильного шпателя зі скла розподіляють рівномірно по поверхні середовища харчування в першу чашці. Потім, не пропалюючи шпатель на вогні, роблять їм же посів на другий і третій чаші. Суть методу Дрігальского полягає в тому, що з кожним наступним посівом культур концентрація бактерій (аеробів) все менше.

На третій чашці вони розподіляються досить відособлено, кожна бактеріальна клітина при цьому дає клональні клітини (у вигляді ізольованої колонії). Їх пересівають на скошений агар для накопичення збудників.

Методика Вейнберга

Певні труднощі викликає виділення чистих культур анаеробних збудників, якщо мікроорганізми не гинуть при контакті з кисневими молекулами. Суть методики полягає у виведенні анаеробних мікробів (у складі матеріалу) в злегка остигнулому (45-50 ° С) розплавленому середовищі харчування (агарозірованному). Проводять 6-10 розведень.

Потім йде наступний етап: необхідно швидко охолодити складу в пробірці і залити її поверхню сумішшю з масла вазеліну і парафіну, що перешкоджає проникненню повітря і сприяє розвитку анаеробних умов.

При сприятливому посіві проростають ізольовані колонії на другий день, які можна отримати з пробірки шляхом її нагрівання за допомогою пальника. З розрізаного агарового стовпчика петлею набирають культури для подальшого дослідження. Отримані колонії розміщують в рідку живильне середовище, на чому етапи виділення колонії анаеробних збудників можна завершити.

Методика Хангейта

Її часто застосовують для виділення аеробних мікробів, що володіють високою киснечуттєвістю. У проведенні такого виділення культури аеробів застосовується методика обертання пробірок.

Методи засівання аеробних бактерій припускають виведення їх на агаризованому розплавленому середовищі. Наявність інертного газу в пробірці дає можливість виростити ізольовані колони аеробних бактерій таким чином, що виділені культури аеробів добре можна побачити навіть неозброєним оком на 2-3 день.

Мікроманіпулятор

Це методика виділення окремих бактеріальних клітин шляхом застосування мікроманіпулятора. Мікроманіпулятор являє собою спеціальний прилад, яким можна виловити з суспензії одну клітку, а також забезпечити можливість посіву культури в пробірку.

Подальша ідентифікація збудника проводиться з урахуванням всіх перерахованих властивостей збудника (аеробів і анаеробів), а також особливостей їх взаємодії з різними речовинами.

Посилання на основну публікацію