Метод напилення

Метод напилення особливо зручний, коли цікавлять дослідника частинки або цілі клітини поміщені на поверхні пластикової підтримуючої плівки. Об’єкти, досліджувані за допомогою даного методу (наприклад, вірусні частки, які з цією метою розпилюють на поверхню плівки і потім висушують), поміщають в безпосередній близькості від розпеченої платинової спіралі (напилення проводиться в умовах глибокого вакууму). Метал спіралі, випаровуючись, осідає на поверхні плівки. Оскільки пучок атомів падає на зразок під невеликим кутом, атоми платини осідають переважно на поверхні, зверненої до спіралі; поверхню же частинок, що знаходиться як би в»тіні», залишається при цьому майже зовсім непокритою металом. При спостереженні напилених препаратів в електронному мікроскопі просторова організація досліджуваного об’єкта виявляється з дуже високою чіткістю.

Зовсім недавно почав застосовуватися новий метод – метод заморожування- травлення. У цьому випадку досліджують зрізи об’єкту, замороженого до дуже низької температури (-100 ° С). Очевидно, що зрізи в цьому випадку не»ріжуть», а сколюють. При ударі ножа утворюється тріщина, що проходить через найслабші точки структури. Наприклад, клітина часто сколюється уздовж поверхні ядерної мембрани, оголюючи при цьому внутрішній вміст ядра. Після сколювання об’єкт поміщають у вакуум і випаровують з поверхні відколу деяка кількість води.

Ця (протравлена ) поверхня потім піддається напиленню платиною, що проводиться способом, який ми описували вище. На заключній стадії приготування препарату біологічний об’єкт видаляють за допомогою ряду ферментів, в результаті чого залишається лише металева репліка досліджуваної поверхні. Ці репліки потім фотографують в електронному мікроскопі звичайним способом. Оскільки будова заморожених клітин найближче до»нативному», метод заморожування- травлення, повідомимо, дозволяє одержати досить гарне зображення інтактних структур клітини, хоча на перший погляд може здатися, що властивості платинового»відбитка»мають бути досить далекі від властивостей живої клітини.

ПОДІЛИТИСЯ: