Ізоляція мутантів SRM

Клітини ізогенних гаплоїдних ліній дріжджів Saccharomyces cerevisiae 71а і 71а на повноцінної середовищі утворюють колонії, мають характерну “зірчасті” форму (ознака Sta +), в колоніях частка клітин rhcr становить 50% і більше.

Генетичний аналіз показав, що “зірчасті” у ліній 71а і 71а обумовлена одночасною присутністю не менше 5 генів, кожен з яких викликає лише відносно слабкий підвищення спонтанної мутабільності. Полігенно ознаки Sta + дозволила використовувати 71аі71ав якості вихідних ліній для відбору мутацій, специфічно блокують або послаблюють мутагенезу (ознака Sta). Спочатку, використовуючи в якості мутагена азотної кислоти і провівши кілька послідовних беккроссов, ізолювали 4 клону Sta-, що дають кожен в статевому потомство від схрещування з 71а або 71а моногенне розщеплення 2Sta +: 2Sta-. Відповідні ядерні мутації незалежного походження, що зумовлюють фенотип Sta, позначили srml, srm2, srmJ і srm4 (srm – spontaneous rho mutation).

Як показало безпосереднє визначення темпів спонтанних мутацій rhcr, виділені нами мутації srm не блокують спонтанний rhcr-мутагенезу, а лише більш-менш відчутно послаблюють його. У мутантів srm темп спонтанних мутацій rhcr залишається набагато вищим, ніж темпи інших спонтанних генетичних змін, таких як генні мутації або втрати і нерасхождение хромосом. У попарних поєднаннях мутації srml-srm4 не посилюють дії один одного.

Надалі було встановлено, що: 1) на спонтанну мутабільність дріжджових клітин можуть надавати помітний вплив порушення хромосомного балансу; 2) мутація srml не тільки змінює спонтанну мутабільність, але, на відміну від трьох інших мутацій srm, здатна викликати значні зміни мітотичної стабільності хромосом у анеуплоїдних клітин. Ці дані вказували на можливу спільність механізмів, які опосередковують (більш імовірно – регулюють) підтримання ядерних і мітохондріальних спадкових структур в дріжджових клітинах. Такі механізми найімовірніше повинні контролюватися множинними генами. Отже, можна намагатися ізолювати нові мутанти srm, які не будуть алельних мутанту srml, але будуть схожі з ним по фенотипическому прояву. Спроби такого роду були зроблені нами двічі. Перша з них привела до виділення мутації srm5.

В результаті другої спроби виділено ще ряд мутантів srm, зокрема, srm8, srml2, srml5 і srml 7, в статевому потомство яких моногенно наследовалась характерна для цих мутантів знижена спонтанна мутабільність. Нижче описуються особливості фенотипічного прояву деяких мутацій srm.

...
ПОДІЛИТИСЯ: